一、試劑盒簡(jiǎn)介

帶gDNA Remover的新一代逆轉(zhuǎn)錄試劑盒為包含去除基因組DNA的高效DNase的新一代快速逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，與上一代產(chǎn)品相比具有更高的逆轉(zhuǎn)錄效率。試劑盒中主要包含3管成分:aDNA Remover中主要包括濃縮的DNase及Buffer;4xEZscript RT Mixl中主要包含了逆轉(zhuǎn)錄所需的所有成分(逆轉(zhuǎn)錄酶、buffer、RNaseInhibitor、dNTPs、Oligo dT18Random Hexamer等)。

帶gDNA Remover的新一代逆轉(zhuǎn)錄試劑盒采用的DNase及Buffer反應(yīng)系統(tǒng)經(jīng)過(guò)特殊的優(yōu)化，僅需室溫(25℃)反應(yīng)5分鐘，就能降解95%以上的基因組 DNA，極大的降低了可能殘留的基因組對(duì)結(jié)果的干擾。

本試劑盒采用的新型M-MLV突變體逆轉(zhuǎn)錄酶具有很強(qiáng)的抗干擾能力及擴(kuò)增能力，擴(kuò)增效率尤佳，同時(shí)采用了新優(yōu)化的反應(yīng)體系，進(jìn)一步提高了逆轉(zhuǎn)錄效率。使用本試劑盒逆轉(zhuǎn)錄15分鐘得到的擴(kuò)增產(chǎn)物量可以達(dá)到AMV逆轉(zhuǎn)錄酶大約1h的產(chǎn)物量(Ct值相同)。后續(xù)逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物建議用于PCR、qPCR，不建議用于基因克隆。

二、產(chǎn)品組分

Components                        EZB-RT2GQ(100Rxnsx20 ul) 

gDNA Remover*1                               550 μl 

4xEZscript RT Mix11*2                       220 μl 

Nuclease free ddH2                             1ml 

*1:包括DNase和Buffer:

*2:包括逆轉(zhuǎn)錄酶、buffer、RNase Inhibitor、dNTPMixture、Oligo(dT)18PrimerRandom Hexamer Primer等組分。

三、保存條件

本試劑盒建議置于-20℃保存。

四、試劑盒特點(diǎn)

1、本試劑盒為預(yù)先混好的4xEZscripRTMixl，只需加入模板RNA和水溫勻后便可以開(kāi)始反應(yīng);使用了新一代逆轉(zhuǎn)錄酶，具有更強(qiáng)的酶活性和更高的靈敏度。

2、含有去除基因組DNA的aDNARemover，只需室溫5分鐘即可去除基因組DNA。

3、只需42℃ 15分鐘即可高效合成熒光定量PCR所需的高質(zhì)量cDNA模板。

4、反轉(zhuǎn)錄引物使用了Oliao(dT)18和Random Hexamer這兩種引物的混合物，極大提高了反轉(zhuǎn)錄的效率。

5、反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可選擇多種儀器如水浴鍋，金屬浴，不局限干PCR儀。

五、注意事項(xiàng)

1當(dāng)同時(shí)需要進(jìn)行數(shù)次反應(yīng)時(shí)，應(yīng)先配制各種試劑的混合液，然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。這樣可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確，減少試劑損失，避免重復(fù)分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)之間產(chǎn)生的誤差。

2aDNA Remover和4xEZscript RTMixl在使用前需上下顛倒混勻，短暫離心后使用。由干酶保存液中含有50%的日油，粘度高，分取時(shí)應(yīng)慢慢吸取。同時(shí)，要使用精確、量程適合的移液槍?zhuān)⑶也灰筎ip插入液面過(guò)深，否則會(huì)因Tip壁粘著造成損失，而使酶量不足。

3、分裝試劑時(shí)務(wù)必使用新的槍頭(Tip)，以防止樣品間污染