產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

三一造血人間充質(zhì)干細(xì)胞高效擴(kuò)增試劑盒（CT-021）適用于在體外培養(yǎng)人臍帶、脂肪、牙髓等多種組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

· 無(wú)異源成份

· 細(xì)胞可穩(wěn)定傳代至第16代

· 無(wú)菌，無(wú)支原體，低內(nèi)毒素

· 可支持人臍帶，脂肪，牙髓，骨髓，胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的快速增殖

保存條件：

人間充質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基與培養(yǎng)基添加劑 B 需 2-8°C 避光保存，有效期為 12 個(gè)月；培養(yǎng)基添加劑 A 需-20°C 保存，有效期 24 個(gè)月；

配制成的wan全培養(yǎng)基可于 2-8°C 條件下存放 4 周；

使用方法：

一、人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清wan全培養(yǎng)基的配制：

1. 于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)前一天，將培養(yǎng)基添加劑 A 從-20°C 冰箱中取出，置于 4°C 冰箱中直至wan全溶解；

2.在將培養(yǎng)基瓶拿進(jìn)超凈臺(tái)之前，用 75%酒精對(duì)其表面進(jìn)行消毒；

3.將培養(yǎng)基添加劑 A 和 B 加入到人間充質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中；

4.吸取基礎(chǔ)培養(yǎng)基洗滌瓶身內(nèi)壁，并重復(fù)操作一次，盡可能使培養(yǎng)基添加劑全部加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中；

5.輕輕搖晃基礎(chǔ)培養(yǎng)基瓶身，使各成分混合均勻，搖晃時(shí)，請(qǐng)避免氣泡產(chǎn)生。將配制好的人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清wan全培養(yǎng)基置于2-8°C 保存。

二、人間充質(zhì)干細(xì)胞的復(fù)蘇：

1.準(zhǔn)備好 37°C 水浴；

2.超凈臺(tái)中，取5mL 人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清wan全培養(yǎng)基于 T25 瓶中，并將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育30min；

3.超凈臺(tái)中，取10mL人間充質(zhì)干細(xì)胞wan全培養(yǎng)基于15mL離心管中，待用；

4.從液氮中取出凍存的人間充質(zhì)干細(xì)胞，置于-80°C冰箱中揮發(fā)管中液氮，而后迅速將凍存管置于

37°C 溫水中，并快速晃動(dòng)凍存管，使其內(nèi)含物盡快融化，待凍存管內(nèi)含物融化wan全后取出；

5.在將凍存管拿進(jìn)超凈臺(tái)之前，用 75%酒精對(duì)其表面進(jìn)行消毒；

6.輕輕重懸細(xì)胞，并將其移入待用的裝有 10mL 人間充質(zhì)干細(xì)胞wan全培養(yǎng)基的 15mL 離心管里；

7.用 1mL 培養(yǎng)基再次沖洗凍存管，并將此懸液移至離心管中，輕輕吹打混勻；

8.室溫下，300g 離心 10min；

9.傾去上清，往沉淀加入 2-3mL 的人間充質(zhì)干細(xì)胞wan全培養(yǎng)基，輕輕吸打均勻；

10.從細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出已預(yù)先孵育 30min 的 T25 瓶，吸去培養(yǎng)瓶中的液體；

11.將細(xì)胞按 0.8-1.0×104 個(gè)活細(xì)胞/cm2 的密度接種到 T25 瓶中，并加入足量的人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清wan全培養(yǎng)基，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞分布均勻；

12.將細(xì)胞置于 37°C，5% CO2 的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

13.第二天，更換新鮮的人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清wan全培養(yǎng)基；

14.每隔兩天更換一次新鮮的培養(yǎng)基，直至細(xì)胞生長(zhǎng)至 80-90%的匯合度。

三、人間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代：

1.將 PBS，胰酶置于 37°C 水浴鍋中預(yù)熱；

2.超凈臺(tái)中，吸去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液；

3.輕輕加入5mL PBS于T25 瓶中，輕輕晃動(dòng)洗滌細(xì)胞后吸去PBS，共洗滌兩次；

4.加入 2mL 濃度為 0.05%的胰酶，輕輕晃動(dòng)，使胰酶溶液均勻覆蓋培養(yǎng)瓶底面。顯微鏡下，當(dāng)70-80%的細(xì)胞變圓時(shí)輕拍培養(yǎng)瓶，并立即加入10mL人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清wan全培養(yǎng)基進(jìn)行中和。輕輕吸取瓶?jī)?nèi)液體反復(fù)沖洗瓶底，使細(xì)胞wan全脫落；

注意：建議使用濃度為 0.05%的胰酶，并且消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以減少胰酶對(duì)干細(xì)胞的損傷。

5.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15mL離心管中，300g離心10min；

6.小心去除上清，而后加入10mLPBS重懸細(xì)胞沉淀，并再300g離心10min；

7.小心去除上清，加入2-3mL人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清wan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，按1：2或1：3的比例接種到新的T25瓶中，再次加入足量的wan全培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞分布均勻；

8.將細(xì)胞置于 37°C，5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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